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    ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)“花板”問(wèn)題分析

    發(fā)布時(shí)間: 2013-10-30  點(diǎn)擊次數(shù): 911次

    ELISA試劑盒結(jié)果“花板”的問(wèn)題對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)造成了很大影響,往往會(huì)使檢測(cè)者做出誤判,是實(shí)驗(yàn)中必須要注意和避免的。

    使用ELISA試劑盒對(duì)血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的結(jié)果中,空白和陰性,陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,根據(jù)衛(wèi)生部臨檢中心提供的數(shù)據(jù),HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范圍均為2NCU,但血液標(biāo)本孔的OD值比較高(大多數(shù)OD值≥0.070)。標(biāo)本的陽(yáng)性率很高,每板除對(duì)照孔外,有時(shí)陽(yáng)性高達(dá)10孔之多,而大多數(shù)真陽(yáng)性標(biāo)本都出現(xiàn)弱陽(yáng)性結(jié)果。

    針對(duì)這種“花板”現(xiàn)象我們通過(guò)多次實(shí)驗(yàn)的分析和判斷,總結(jié)了一些經(jīng)驗(yàn),分析如下:

     

    1 標(biāo)本、試劑、儀器

    1.1 標(biāo)本 出入境人員的血液標(biāo)本。

    1.2 試劑 HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠(chǎng)家的ELISA試劑盒。

    1.3 儀器 LD4-2型腦心機(jī)BID RAD1575型洗板機(jī)BID RAD550酶標(biāo)儀。

     

    2 方法

      所有被檢出入境人員的血液標(biāo)本,按照各個(gè)廠(chǎng)家提供的ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗(yàn)項(xiàng)目操作。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

     

    3 結(jié)果

      所使用不同廠(chǎng)家的試劑有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“花板”問(wèn)題。

     

    4 分析

      在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中,所用的儀器及加樣過(guò)程都處于正常狀態(tài)的情況下,步驟均按照各種試劑說(shuō)明書(shū)的要求去做,排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響外,ELISA試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常,只有檢測(cè)的血液標(biāo)本情況異常。根據(jù)國(guó)家和疾控中心報(bào)告陽(yáng)性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下,HBsAg在用ELISA之前都經(jīng)過(guò)了快速金標(biāo)試劑的檢測(cè),陽(yáng)性標(biāo)本得到了一定的控制。因此,原因可能是在標(biāo)本的處理,特別是放置時(shí)間、離心速度和離心時(shí)間方面的問(wèn)題。所以,標(biāo)本的處理就成為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的主要可疑因素。

    為了避免“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn),降低檢測(cè)的假陽(yáng)性率,獲取準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時(shí)的ELISA試劑。

    實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)該注意的問(wèn)題:

    (1)抽取樣本時(shí)應(yīng)抽出足夠檢驗(yàn)量的血液標(biāo)本,按比例加抗凝劑,便于離心,得到足夠的血清(血漿)。

    (2)血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1~2h,使血液凝固收縮,然后離心檢測(cè)或讓血液后再檢測(cè)。這樣才能使得血液充分收縮,讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽(yáng)性率降至zui低。

    (3)檢測(cè)之前,加大離心轉(zhuǎn)速,盡量延長(zhǎng)時(shí)間,使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細(xì)胞與血清*分離。

    (4)加樣時(shí)不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白,要按照操作說(shuō)明書(shū)去做,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    (5)封板溫育時(shí),各孔一定要封嚴(yán),防止陽(yáng)性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

    (6)手工洗板時(shí)應(yīng)注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

     

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