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    促腎上腺皮質激素(ACTH)ELISA試劑盒準確性

    發(fā)布時間: 2015/10/5  點擊次數(shù): 758次
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    促腎上腺皮質激素(ACTH)ELISA試劑盒用于測定猴血清、血漿及相關液體樣本中促腎上腺皮質激素(ACTH)含量。

    實驗原理
    促腎上腺皮質激素(ACTH)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中猴促腎上腺皮質激素(ACTH)水平。用純化的猴促腎上腺皮質激素(ACTH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促腎上腺皮質激素(ACTH),再與HRP標記的促腎上腺皮質激素(ACTH)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的促腎上腺皮質激素(ACTH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中猴促腎上腺皮質激素(ACTH)濃度。

    ·準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,大于等于0.9900。 
    ·靈敏度:zui低檢測濃度小于10 pg/ml。 
    ·特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。 
    ·重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于15%。 

    促腎上腺皮質激素(ACTH)ELISA試劑盒操作步驟
    1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。
    為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
    2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。
    3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 
    4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
    5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
    6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
    7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
    8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

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