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    腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)需求

    發(fā)布時(shí)間: 2015/9/21  點(diǎn)擊次數(shù): 792次
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    腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的器材
    (1) 聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標(biāo)板)40孔或96孔,人ELISA試劑盒ELISA檢測(cè)儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。
    (2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
    (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。

    腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的試劑
    (1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液): NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml
    (2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸餾水至1000ml
    (3) 稀釋液: 牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 人ELISA試劑盒加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
    (4) 終止液(2M H2SO4): 蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
    (5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸): 0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml 0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml 加蒸餾水50ml。
    (6) TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液: TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml 底物緩沖液(PH5.5) 10ml 0.75%H2O2 32μl
    (7) ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物緩沖液(PH5.5) 1ml 3%H2O2 2μl 
    (8) 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
    (9) 正常人血清和陽性對(duì)照血清。

    腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒的包被:
    包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時(shí)間,包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定??贵w和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置一夜,37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,每批材料需通過實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。

    腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒的封閉:
    封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程??乖蚩贵w包被時(shí)所用的濃度較低,吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,其zui大的特點(diǎn)是價(jià)廉,可以高濃度使用(5%)。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用,但由于奶粉的成份復(fù)雜,而且封閉后的載體不易長期保存,因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。 

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