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    大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒操作原理

    發(fā)布時(shí)間: 2016-01-27  點(diǎn)擊次數(shù): 2258次

    大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)水平。用純化的大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX),再與HRP標(biāo)記的Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)濃度。
    大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒操作步驟
    1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

    2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
    3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
    4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
    5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
    6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
    7.         溫育:操作同3。
    8.         洗滌:操作同5。
    9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
    10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
    11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 

    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒有效期:6個(gè)月
     

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