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    冷凍切片原理及其制作方法分析

    發(fā)布時(shí)間: 2015-07-29  點(diǎn)擊次數(shù): 1384次

        冷凍切片是利用物理降溫的方法將新鮮的組織標(biāo)本冷凍使其產(chǎn)生一定的硬度進(jìn)行切片的技術(shù)方法。與石蠟切片相比,由于冷凍切片不需脫水包埋因此制片速度 快,是為手術(shù)進(jìn)行中的臨床醫(yī)師提供病理診斷的良好方法。ELISA試劑盒此外由于冷凍切片的標(biāo)本是未經(jīng)固定的新鮮組織,因此冷凍切片也是脂肪染色、酶組織化學(xué)染色以及某些 免疫組織化學(xué)染色和原位分子雜交的理想制片方法。冷凍切片的不足是組織細(xì)胞的形態(tài)略遜于石蠟切片。

    二、冷凍切片的制作方法

    利用氯乙烷噴灑、二氧化碳噴射、半導(dǎo)體制冷的方法均可制作普通的冷凍切片,用于術(shù)中的病理診斷。恒冷箱冷凍切片機(jī)可以制作適用于各種目地的冷凍切片,是目前zui為常用的理想冷凍切片制片方式。

    1.冷凍切片的技術(shù)操作方法

    (1)將恒冷箱冷凍切片機(jī)的速凍頭和箱內(nèi)溫度調(diào)整到適宜的切溫度,一般情況下為一18~一25℃。
    (2)在標(biāo)本冷凍托上涂布一層冷凍包埋劑一OCT,然后將取材后新鮮標(biāo)本安放在標(biāo)本冷凍托上并用OCT覆蓋標(biāo)本。
    (3)標(biāo)本冷凍完成后將標(biāo)本托固定在切片機(jī)的機(jī)頭上,調(diào)整機(jī)頭位置使其恰好位于切片刀的后方。
    (4)使用粗切削方式進(jìn)行標(biāo)本的粗切削至暴露標(biāo)本的zui大平面,ELISA試劑盒使用自動(dòng)推進(jìn)方式連續(xù)切削2~3刀后用毛筆清除機(jī)頭、標(biāo)本托及切片刀上的組織碎屑。
    (5)調(diào)整并確認(rèn)切片的厚度,一般為4~8 um,染脂肪和神經(jīng)組織應(yīng)控制在12~25 um。
    (6)放下防卷板使防卷板的位置恰好與切片刀的刀刃*平行并略突出于刀刃。
    (7)以自動(dòng)推進(jìn)的方式進(jìn)行切片,良好的切片將在防卷板的下方形成一張完整平整的薄片,如切片略有彎曲可用小毛筆輕輕展平切片。
    (8)打開防卷板,用載玻片平穩(wěn)地輕壓切片使其平整地吸附到載玻片上。

    三、冷凍切片的染色

    切好的冷凍切片立即投入丙酮中進(jìn)行固定,一般固定1~2 min即可進(jìn)行染色,用于免疫組化染色的冷凍切片應(yīng)在切片略干時(shí)即刻投入冷甲醇中固定10~15 rmin然后進(jìn)行相應(yīng)的組織化學(xué)染色程序。

    1.冷凍切片的HE染色程序。

    (1)切片在丙酮中固定1~2 min。
    (2)水洗5 s。
    (3)使用新鮮的Harris蘇木精染液染細(xì)胞核2min。
    (4)水洗5 s。
    (5)在0.5%的鹽酸乙醇液中分化1~3 s。
    (6)水洗5 s。
    (7)在0.5%~1%的伊紅染液中染細(xì)胞質(zhì)20~30 s。
    (8)水洗5 s。
    (9)在95%乙醇I、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇I、ELISA試劑盒100%乙醇Ⅱ、中逐級(jí)脫水各3~5 s。
    (10)甲苯I、二甲苯Ⅱ透明各5 s。
    (11)干組織周圍的二甲苯,在二甲苯尚未干燥前滴加光學(xué)樹脂膠封片。

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