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    ELISA操作嚴格要求定當做出好實驗

    發(fā)布時間: 2018-09-18  點擊次數(shù): 1276次

    我們知道,可以用作ELISA試劑盒測定的標本很廣泛,包括了體液、分泌物和排泄物等,均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。今天上海恒遠為您解說:ELISA操作嚴格要求定當做出好實驗。

    按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。

    ELISA試劑盒的配制:對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書,注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié),將凍干的細胞因子復(fù)溶。一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度,建議孵育標準品和標本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物ELISA試劑盒酶的活性。

    ELISA試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內(nèi)醫(yī)學檢驗一般均用板式點。
    洗板方法:
    ① 手工洗板,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
    ② 自動洗板,如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 

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